这里还葬有他的两个皇后（孝端、孝靖）。定陵坐落在大峪山下，位于长陵西南方，建于1584～1590年（万历十二年至万历十八年）。
1966年，“文、革”期间，定陵被当做“牛鬼蛇神”批斗，万历皇帝及两位皇后的尸骨被焚。
定陵的主要建筑有祾恩门、祾恩殿、宝城、明楼和地下宫殿等。
占地182000平方米，它是十三陵中唯一一座被发掘了的陵墓。
但是由于当时人们文物保护意识不强，和当时特定的历史时期（主要指文、命和破四旧）。因此，它的发掘也被认为是考古史上的一大悲剧。
现在定陵只剩下一座地宫可供游人参观。不过，这也能够让人看到当时定陵的豪华。
地宫是定陵的主要部分，深27米，由前、中、后、左、右5个厅组成，建筑面积1195平方米。
其中左、右配殿是相对称的两个殿，中间各自有一个用汉白玉垒砌的棺床。两配殿有甬道与中殿相通。
中殿内有3个汉白玉石座，并摆放皇帝和皇后的五供和长明灯。
后殿是地宫内最大的一个殿，殿内棺床正中央放置有万历皇帝和两位皇后棺椁。
棺椁周围放置有玉料、梅瓶及装满殉葬品的红漆木箱。
出土的随葬品包括帝后服饰、册宝、明器、木俑、甲胄、刀、箭、金、银、玉、瓷器皿以及大量丝织品。
随葬的金、银、玉器和珠饰珠宝种类繁多，制作精美，保存完好。至今仍璀璨生辉，雍容华贵，令人惊叹不已。
而这些东西，大多被损毁，所以定陵的陪葬品虽然比梁庄王要多，但却不如梁庄王墓保存下来的多，也不如梁庄王墓出土的东西珍贵。
比如出土的嵌宝金冠顶就有5个，其中最大的一件高4.8厘米，直径5.2厘米，重41.1克，顶端嵌一颗浅黄色透明宝石，冠面作八瓣花形，嵌八颗红、蓝、绿各色的宝石，亮丽多彩，至为宝贵。
出土的王妃封册，铜质髹（音“休”）金，是王妃魏氏于1433年（宣德八年）被册封为王妃的任命文书。